Створення дріжджових продуцентів нових флавінових антибіотиків
ДНК в геном дріжджів Сandida famata, оптимізовано CRISPR-Cas9 систему для
С. famata, проведено дизайн генів rosB, rosA та та rosC S. davaonensis,
сконструйовано плазміди для мультикопійної інтеграції, що містять адаптовані
гени rosB, rosA та rosC під контролем сильного промотора. Отримані плазміди
були використані для селекції штамів дріжджів С. famata з посиленою
експресією відповідних генів. Сконструйовано продуцент амінорибофлавіну на
основі дріжджів С. famata здатний до надсинтезу ФМН шляхом посилення
експресії гена rosB. Хроматографічний та масспектрометричний аналіз виявив
амінорибофлавін, що нагромаджував рекомбінантний штам у культуральному
середовищі у концентрації 5,2 мг/л. Сконструйовано штам Pichia pastoris з
посиленою експресією генів FMN1, rosB, rosA та rosC здатний до продукції
розеофлавіну у концентрації 3 мг/л. Розроблено схему виділення та очищення
амінорибофлавіну та розеофлавіну з культуральної рідини сконструйованих
штамів та отримано препаративні кількості цих антибіотиків. Підібрано умови
культивування для сконструйованих штамів для максимального нагромадження
цих антибіотиків. Оптимізовано умови культивування продуцента розеофлавіну
у ферментері. За умов культивування у лабораторному ферментері об’ємом 1 л,
рекомбінантний штам P. pastoris продукував 46 мг/л розеофлавіну.
УЧАСНИКИ ПРОЄКТУ
Керівник проєкту: Дмитрук Костянтин Васильович Термін у проєкті: -
ФІНАНСУВАННЯ ПРОЄКТУ
| Фінансування проєкту, у тому числі по етапах | Перший етап | Другий етап | Третій етап | Четвертий етап |
|---|---|---|---|---|
| 4954761.84 | 2496638.00 | 2458123.84 |
ВИТРАТИ ПРОЄКТУ
| Прямі витрати | Оплата праці без нарахувань | Нарахування на оплату праці | Обладнання/устаткування | Непрямі витрати | Матеріали | Фінансовий звіт про використання бюджетних коштів |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 4728507.92 | 1210246.00 | 262992.00 | 2020 рік Ампліфікатор з двома блоками Mastercycler nexus X2, виробництва Eppendorf - 326533,00 грн Мікроцентрифуга з охолодженням 5424 R G в комплексі з ротором F A- 45 -24-l l, виробництва EPPENDORF - 378474,00 грн Біоспектрометр BioSpectrolllctcr@ basic в комплекті з мікрокюветою μCuvcttc G l.0,виробництва Eppcndorf (Німеччина) - 328276,00 грн Стерилізатор паровий серії MO‐ ST‐VA - 157000,00 грн Комплексна система для проведення електрофорезу та блоттігу OmniPAGE Mini, 10x10 см - 33323,00 грн Колонка для верх Asccdis(R)C18,250.O x4.6 мм, 5 мкм - 31798,00 грн Картридж передколонковий Ascentis(R) C18 Supelguard(TM), 20.0X4. 0 мм, 5 мкм, в наборі з тримачем і фітингами - 8225,00 грн Стаціонарний лабораторний pH-uerp S2lO-Bio, виробництва Mettler Toledo (Швейцарія) - 49665,00 грн Ноутбук Dream Machincs (G1650 - 15) - 27000,00 грн Сканер A4 Canon CanoScan LIDE 400 - 2735,00 грн Оливний (масляний) радіатор ELECTROLUX Sphcrc EOH/M - 6221 - 4198,00 грн Термостат типу "Драй-блок", BIO TDB‐ 100 - 44551,00 грн Гомогенізатор Vorlex-Genie@ 2 - 30670,00 грн 2021 рік Камера для горизонтального електрофорезу multiSUB Mini - 35478,15 грн |
226253.92 | 2020 рік - 706974,00 грн 2021 рік - 1090369,77 грн
|
2020.01_0090_Дмитрук_95_01.2020_ЗКнннн.pdf |